定氮儀是利用凱氏定氮法對(duì)物質(zhì)中蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定的儀器。定氮儀按其配置分,可以分為全自動(dòng)凱氏定氮儀和半自動(dòng)定氮儀。其中全自動(dòng)凱氏定氮儀包括消化爐和凱氏蒸餾裝置。定氮儀操作時(shí)可以分為人工模式和自動(dòng)模式,不同的實(shí)驗(yàn)者,可以根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的熟練程度,自由選擇哪種方式。一般的,新手我們推薦使用自動(dòng)模式,可以為你省去很多的步驟。目前,定氮儀已經(jīng)廣泛使用于測(cè)定乳核乳制品中蛋白質(zhì)的測(cè)定。
下面我們主要介紹下,我們?cè)谑褂?a >定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí),如何清洗定氮儀。
儀器安裝前,定氮儀各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈,所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中,煮約10min,水洗、水煮10min,再水洗數(shù)次,然后安裝并固定在一只鐵架臺(tái)上。
儀器使用前,微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌,以除去管道內(nèi)可能殘留的氨,正在使用的定氮儀,每次測(cè)樣前,蒸氣洗滌5min即可。較長(zhǎng)時(shí)間未使用的儀器,重復(fù)蒸氣洗滌,不得少于三次,并檢查儀器是否正常。仔細(xì)檢查各個(gè)連接處,保證不漏氣。這樣,一方面保證了儀器的清潔,另一方面,也同時(shí)對(duì)儀器進(jìn)行了檢查,一些壞的零部件,可以及時(shí)被查出并替換。
定氮儀安裝完后,我們需具體對(duì)儀器的內(nèi)部進(jìn)行清潔。首先在定氮儀蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水,加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性,以避免水中的氨被蒸出而影響結(jié)果,并放入少許沸石(或毛細(xì)管等),以防爆沸。這個(gè)步驟有點(diǎn)類似于凱氏定氮法的消化前步驟,用相應(yīng)的試劑對(duì)其進(jìn)行清洗。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應(yīng)室,但玻杯內(nèi)的水不要放光,塞上棒狀玻塞,保持水封,防止漏氣。這一步可直接驗(yàn)證插管是否可以使用。蒸氣發(fā)生后,立即關(guān)閉廢液排放管上的開關(guān),使蒸氣只能進(jìn)入反應(yīng)室,導(dǎo)致反應(yīng)室內(nèi)的水迅速沸騰,蒸出蒸氣由反應(yīng)室上端口通過定氮球進(jìn)入冷凝管冷卻,在冷凝管下端放置一個(gè)錐形瓶接收冷凝水。從定氮球發(fā)燙開始計(jì)時(shí),連續(xù)蒸煮5min,然后移開煤氣燈。沖洗完畢,夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管,由于氣體冷卻壓力降低,反應(yīng)室內(nèi)廢液自動(dòng)抽到反應(yīng)室外殼中,打開廢液排出口夾子放出廢液。整個(gè)清洗過程,到這里就結(jié)束了,經(jīng)過清洗這個(gè)過程,定氮儀內(nèi)部環(huán)境已經(jīng)符合我們測(cè)定蛋白質(zhì)含量的需求,另外,定氮儀的各部件也得到了檢驗(yàn),可以及時(shí)更換漏氣或者其他壞了的部分。根據(jù)以上步驟重復(fù)清洗2~3次,再在冷凝管下?lián)Q放一個(gè)盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口*浸沒在溶液中,蒸餾1~2min,觀察錐形瓶?jī)?nèi)的溶液是否變色。如不變色,表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈。移去錐形瓶,再蒸餾1~2min,用蒸餾水沖洗冷凝器下口,關(guān)閉煤氣燈,定氮儀即可供測(cè)樣品使用。
這樣,凱氏定氮儀整個(gè)清洗過程就結(jié)束了。凱氏定氮儀在測(cè)定蛋白質(zhì)含量前,一般都需要經(jīng)過清洗,這樣對(duì)于測(cè)定結(jié)果,會(huì)更加。另外,也可以保證實(shí)驗(yàn)室人員的安全,因?yàn)樵谇逑催^程中,對(duì)儀器進(jìn)行了檢查,排除了因?yàn)閮x器的故障而造成了危險(xiǎn)。